Sala biograficzna to część wystawy poświęcona życiu prywatnemu oraz artystycznej i społecznej działalności Wyczółkowskiego. Na ekspozycji pokazano kilka zdjęć należących do artysty. Na szczególną uwagę zasługują tu zdjęcia Leona z czasów studenckich oraz wzbudzające wiele uśmiechu fotografie Wyczółkowskiego podczas wakacji nad morzem. Należne miejsce znalazła tu również żona malarza – Franciszka Wyczółkowska. Pokazana została zarówno na zdjęciach jak i portretach. W tym pomieszczeniu znajduje się również jeden z najważniejszych, dla Galerii Leona Wyczółkowskiego, eksponat. Jest to Akt darowizny Franciszki Wyczółkowskiej dla Miasta Bydgoszczy z 8 kwietnia 1937. W myśl tego dokumentu, zgodnie z ostatnią wolą męża, wdowa przekazała na rzecz muzeum dzieła oraz rzeczy osobiste Patrona. W tej Sali znajduje się również najbardziej znany obraz Wiosna – wnętrze pracowni artysty oraz jedno z ostatnich dzieł Kwiaty z 1936 r.